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慢病毒包装
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◆ 技术简介 ◆


 慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷I型病毒)为基础改造而来,是逆转录病毒的一种,所以称之为“慢”病毒,Lenti在拉丁文中就是慢的意思。慢病毒有着广泛的宿主,对于分裂和非分裂细胞均具有感染能力,对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,使目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加。慢病毒载体携带并整合进入宿主细胞的目的基因可以在靶细胞中得到持续高效稳定的表达。另外,慢病毒载体中可以插入组织细胞特异性的启动子和增强子,提高转入基因的转录靶向性,使慢病毒载体中的目的基因在特定的组织细胞中表达。经过构建后的慢病毒载体可以携带大约5 kb,甚至更长的目的基因。慢病毒包装是将外源基因包装到病毒的外壳中,利用病毒对宿主细胞的感染性,将外源基因整合到细胞基因组内的技术。慢病毒具有转染效率高、可以永久表达目的基因以及高度安全性等特点,可以用于获得稳转细胞株和转基因动物。



 

◆ 慢病毒包装系统介绍 ◆

慢病毒.png


 

◆ 包装的方法 ◆

 

慢病毒包装示意图.png


携带外源基因的慢病毒载体与包装质粒共转染包装细胞,一段时间后收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,经浓缩和纯化后获得慢病毒液。




 

◆ 结果案例 ◆


慢病毒滴度1.png

慢病毒滴度2.png

慢病毒滴度3.png

慢病毒滴度4.png

慢病毒滴度5.png

慢病毒滴度6.png

慢病毒滴度7.png

10ul

1ul

10-1ul

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10-3ul

10-4ul

10-5ul

 




 ◆ 服务类型 ◆



项目名称

内容

周期

价格

过表达慢病毒包装

<3kb,滴度1x108TU/ml ,1ml,送200ul对照

2-3周

询价

<3kb,滴度1x108TU/ml ,500ul,送100ul对照

2-3周

询价

3-4kb,滴度5x107TU/ml ,1ml,送200ul对照

2-3周

询价

3-4kb,滴度5x107TU/ml ,500ul,送100ul对照

2-3周

询价

shRNA慢病毒包装

1x108 TU/ml ,1ml,送100ul对照

2-3周

询价

1x108 TU/ml ,500ul,送100ul对照

2-3周

询价

3+1慢病毒构建+包装

3个shRNA慢病毒,1x108TU/ml ,1ml/病毒,送1ml对照

5-6周

询价





◆ 服务流程◆

1682572066703823.png

 



◆ 应用 ◆

(1)体外感染细胞

(2)慢病毒载体能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型原代细胞和大部分细胞系。

(3)慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,因而可以达到持久性表达,从而构建稳转细胞株,体外进行细胞功能学实验,包括细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡等研究。稳定表达目的基因的肿瘤细胞株还可以进一步构建肿瘤动物模型,进行体内基因功能验证,药效药代,活体成像等检测,进一步研究体内肿瘤发生、发展和转移及药物治疗的效果。




◆ 技术优势 ◆



包装容量大,可以携带大约5kb的外源片段

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滴度高,通常滴度可以达到108~1010 TU/mL;

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安全性高:未发现致病性,慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T细胞治疗;

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免疫原性低:直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验。

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宿主范围广,可以感染分裂或者非分裂的细胞,也可以感染质粒较难感染的细胞;

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表达时间长,具有整合性,可携带外源基因整合到宿主中,在靶细胞中得到持续高效稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,常用于构建稳定细胞株;

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