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克隆形成
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技术简介

细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。其中细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。

贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性增殖能力两个重要性状

 

实验方法


将处于对数生长期的细胞胰酶消化后,完全培养基(基础培养基+10%胎牛血清)重悬成细胞悬液,并计数;


细胞接种:于6孔板培养板中各实验组接种400-1,000个细胞/;


继续培养到14天或绝大多数单个克隆中细胞数大于50为止,中途每隔3天进行换液并观察细胞状态;


克隆完成后,在显微镜下对细胞进行拍照,然后PBS洗涤1次,每孔加入1 mL 4%多聚甲醛固定30-60 minPBS洗涤1次;


每孔加入结晶紫染液1ml,细胞10-20 min;


PBS 洗涤细胞数次,晾干,数码相机拍照 (分别对整个六孔板及每个孔进行单独拍照)

 



 案例展示


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服务类型


项目名称

内容

周期

价格

克隆形成

检测细胞群体依赖性和细胞增殖

2-3

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服务流程




项目服务流程.jpg




 


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