细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。其中细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。
贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状
①
将处于对数生长期的细胞胰酶消化后,完全培养基(基础培养基+10%胎牛血清)重悬成细胞悬液,并计数;
②
细胞接种:于6孔板培养板中各实验组接种400-1,000个细胞/孔;
③
继续培养到14天或绝大多数单个克隆中细胞数大于50为止,中途每隔3天进行换液并观察细胞状态;
④
克隆完成后,在显微镜下对细胞进行拍照,然后PBS洗涤1次,每孔加入1 mL 4%多聚甲醛固定30-60 min,PBS洗涤1次;
⑤
每孔加入结晶紫染液1ml,细胞10-20 min;
⑥
PBS 洗涤细胞数次,晾干,数码相机拍照 (分别对整个六孔板及每个孔进行单独拍照)
服务类型
项目名称 | 内容 | 周期 | 价格 |
克隆形成 | 检测细胞群体依赖性和细胞增殖 | 2-3周 | 询价 |
服务流程